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                        1. <strong id="f9aee"></strong>
                        2. <xmp id="f9aee"><strong id="f9aee"></strong>
                          1. <strong id="f9aee"><delect id="f9aee"></delect></strong>

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                            <tbody id="f9aee"></tbody>
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                          3. <noframes id="f9aee"><nobr id="f9aee"></nobr>
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                                        2. <output id="f9aee"></output>

                                          <nobr id="f9aee"></nobr> <label id="f9aee"><label id="f9aee"></label></label>
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                                        4. <label id="f9aee"><output id="f9aee"><acronym id="f9aee"></acronym></output></label>

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                                          3. <cite id="f9aee"></cite>
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                                              <code id="f9aee"></code>

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                                                    3. <label id="f9aee"></label>

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                                                        1. <nobr id="f9aee"><optgroup id="f9aee"></optgroup></nobr>

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                                                                                                  2. <label id="f9aee"><output id="f9aee"><acronym id="f9aee"></acronym></output></label>

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                                                                                                          1. <menuitem id="f9aee"><strong id="f9aee"></strong></menuitem><menuitem id="f9aee"><strong id="f9aee"><dl id="f9aee"></dl></strong></menuitem>
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                                                                                                                  <menuitem id="f9aee"><strong id="f9aee"><output id="f9aee"></output></strong></menuitem>

                                                                                                                  
                                                                                                                  

                                                                                                                    1. <label id="f9aee"><output id="f9aee"></output></label>
                                                                                                                      <label id="f9aee"><output id="f9aee"><dl id="f9aee"></dl></output></label>

                                                                                                                      <label id="f9aee"></label>

                                                                                                                      <tbody id="f9aee"></tbody>

                                                                                                                      1. <dd id="f9aee"></dd>

                                                                                                                        <code id="f9aee"></code>

                                                                                                                      2. <meter id="f9aee"><code id="f9aee"><var id="f9aee"></var></code></meter>
                                                                                                                        <tbody id="f9aee"><code id="f9aee"></code></tbody>

                                                                                                                          1. <menuitem id="f9aee"><output id="f9aee"></output></menuitem>
                                                                                                                            1. <meter id="f9aee"><meter id="f9aee"></meter></meter>

                                                                                                                                <meter id="f9aee"></meter>
                                                                                                                              1. <tbody id="f9aee"><nobr id="f9aee"></nobr></tbody>
                                                                                                                                1. <menuitem id="f9aee"><strong id="f9aee"><acronym id="f9aee"></acronym></strong></menuitem><nobr id="f9aee"><code id="f9aee"><var id="f9aee"></var></code></nobr>
                                                                                                                                  <label id="f9aee"><output id="f9aee"></output></label>
                                                                                                                                2. <menuitem id="f9aee"></menuitem>

                                                                                                                                              <noframes id="f9aee"><meter id="f9aee"></meter>

                                                                                                                                            1. <meter id="f9aee"></meter>
                                                                                                                                              <tbody id="f9aee"><nobr id="f9aee"><var id="f9aee"></var></nobr></tbody>

                                                                                                                                              <output id="f9aee"><acronym id="f9aee"><acronym id="f9aee"></acronym></acronym></output>

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                                                                                                                                                1. <menuitem id="f9aee"><output id="f9aee"></output></menuitem>
                                                                                                                                                  <meter id="f9aee"><var id="f9aee"><input id="f9aee"></input></var></meter>
                                                                                                                                                2. <menuitem id="f9aee"><output id="f9aee"><dl id="f9aee"></dl></output></menuitem>

                                                                                                                                                  1. <output id="f9aee"><acronym id="f9aee"></acronym></output>
                                                                                                                                                  2. <strong id="f9aee"><strong id="f9aee"><dl id="f9aee"></dl></strong></strong>

                                                                                                                                                      <nobr id="f9aee"></nobr>

                                                                                                                                                          1. <code id="f9aee"></code>
                                                                                                                                                              <tbody id="f9aee"><tbody id="f9aee"><var id="f9aee"></var></tbody></tbody><tbody id="f9aee"></tbody>
                                                                                                                                                              <cite id="f9aee"></cite>
                                                                                                                                                              1. <label id="f9aee"><label id="f9aee"><acronym id="f9aee"></acronym></label></label>
                                                                                                                                                              2. <label id="f9aee"><output id="f9aee"><dl id="f9aee"></dl></output></label>

                                                                                                                                                              3. <label id="f9aee"></label>

                                                                                                                                                                歡迎來到安諾倫(北京)生物科技有限公司網站!

                                                                                                                                                                熱門關鍵詞:抗體類,蛋白類,分子細胞類,化學品與試劑

                                                                                                                                                                產品中心PRODUCTS
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                                                                                                                                                                有助于提高蛋白表達目的的實驗方案

                                                                                                                                                                發布時間:2022-01-19   點擊次數:332次
                                                                                                                                                                  克隆基因在細胞中表達對理論研究和實驗應用都具有重要的意義。通過表達能探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理,同時克隆基因表達出所編碼的蛋白質可供作結構與功能的研究。大腸桿菌是目前應用廣泛的蛋白表達系統,其表達外源基因產物的水平遠高于其它基因表達系統,表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的80%。本實驗中,攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BlL21中,在37℃,IPTG誘導下,超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素?;D移酶蛋白,該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸(NTA)使鎳離子(Ni2+)固相化的層析介質加以提純,實為金屬熬合親和層析(MCAC)。蛋白質的純化程度可通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分析。
                                                                                                                                                                  有助于提高蛋白表達目的的實驗方案:
                                                                                                                                                                  1.降低蛋白合成的速度??梢酝ㄟ^以下方法實現:
                                                                                                                                                                  a.降低培養溫度b.使用弱啟動子。
                                                                                                                                                                  c.使用低拷貝數的質粒表達載體d.降低誘導物的濃度。
                                                                                                                                                                  e.在比較高的菌密度進行較短的時間誘導。
                                                                                                                                                                  2.改變培養基。
                                                                                                                                                                  a.培養基中加入可以幫助蛋白折疊的因子。
                                                                                                                                                                  b.加入緩沖液保持pH穩定c.加入1%的葡萄糖,抑制lac啟動子。
                                                                                                                                                                  d.加入山梨糖醇等可以穩定蛋白天然結構的因子。
                                                                                                                                                                  e.加入乙醇,thiols and disulfides等。
                                                                                                                                                                  3.分泌表達。使目的蛋白分泌到周質空間。
                                                                                                                                                                  周質空間的氧化性的環境有利于二硫鍵的形成,而胞內則是還原性的。周質空間有折疊酶DsbA和DsbC的存在,幫助蛋白正確折疊。
                                                                                                                                                                  周質空間很少有蛋白酶存在,不會被水解。
                                                                                                                                                                  可以使對細胞有毒性的蛋白大量存在。
                                                                                                                                                                在線客服
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